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稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的B16细胞系的建立_论文


18 ? 08   中国免疫 学杂 志 2 1 年第 2 01 7卷  di1.99jin 10 -8X.0 1 1 . 8 o:0 36/. s . 044 2 1 .2 0   s 0 0 ? 免疫 学 技 术 与方 法 ?   稳定 表 达 人 乳 头瘤 病 毒 ( V)8型 E E HP 5 6 7融 合基 因 的 B1 胞 系的  6细 建 立①   王 鹤 于继 云② 李 力  ( 西 医科 大 学附属 肿瘤 医院 , 宁 502 ) 广 南 30 1  文献标识码 A   文章编号 10 .8x(o 11-080   004 4 2 l )218 . 5 中国图书分类号  R 33 7 .  [ 摘  要 ] 目 的: 建 pR Snom,5 E 研 真 核 表 达 载 体 , 定 转 染 入 小 鼠黑 色 素 瘤 B6细胞 , 立 稳 定 表 达    构 IE _e- v 8 6 稳 1 建 H V 8 6 7 因的 B 6细胞系。方法 : P 5EE 基 1 采用 P R方法扩增 出 H V 8 6 7 合基 因的全 长序列 , C P 5E E 融 利用 D A重组 技术将 其定 向  N 插入 到真核表达载体 pR Sno , lE -e 中 并加入酶切位点 和 6 i 标签 , ×h s 构建重 组真核 表达质 粒 pR SnoH V 8 6 7 lE -e- P 5 E E 。利用 阳离  子脂质 体介 导法将其转染入小 鼠黑色 素瘤 B 6细胞 , G 1 1 经 4 8加压筛 选 出稳 定转染 的 阳性 克隆 。利 用 Wet  l 、 sr b t流式 细胞  e o n 术、 免疫荧光等检测方法验证 H V 8 6 7融合基 因在稳定转 染 的 B 6细胞株 中的表 达 。结 果 : P R、 P5EE 1 经 C 限制性 内切 酶鉴定及  测序分析 ,lE -e- P 5 E E pR SnoH V 8 6 7重组质粒构建正确 , 染 B 6细胞株 后 , 转 1 经过 Wet  l 、 s r b t流式细胞术 和免疫荧 光等检测 显示  e o n B6 1 细胞株能够稳定 、 效 表达 H V 8 6 7融合 基 因 , 明 B 6H V 8 6 7稳定 转 染细 胞 系构 建成 功 。结论 : 功构 建 了  高 P 5E E 表 1. P 5E E 成 p E -e. P 5E E l SnoH V 8 6 7真核表达载体 , R 建立 了可 以高效 、 稳定 表达 H V 8 6 7融合基因的 B 6 P5EE 1 细胞 系。该稳定转染 细胞 系的建  立 为进 一步研究 H V 8治疗 性基因疫苗的功能提供 了良好 的靶细胞 , P5 为其在肿瘤免疫治疗 中的应用奠定 了研究基 础。   [ 键词 ] 人乳头瘤病毒 5 关 8型 ;6 7 因 ; EE 基 稳定 转染 ; 鼠黑 色 素瘤 细 胞  小 Esa ls m e t a d i n i c to o   6 c l ln   t b y e p e sng h m a   a il - t bih n   n   de tf a i n  f B1   el i e sa l   x r s i   u i   n p p lo   ma iu H v)tp  8 E E   s n g n   vr s( P y e5   6 7 f i   e e uo W N   e Y  i u , L . u r o i lfG agi d a U i rt, a nn  30 1 C i   A GH , U J Y n Ⅱ i Tmo  s t    u nx Mei l nv sy N n i 50 2 , hn — H pao   c   ei g a [ bt c] O jc v :o os uth ua o c xr s nvc r f P 5 6 f i   n n al tnf t 1 e n i   A sr t a   bet eT  nt cte kr t  pe i  et     V 8E   u o g eads byr s c B 6cllewt i c r   e y ie so ooH sn e t  a e   li h i. e h ds T e f llngh o  tM t o : h  u  e t  fHPV5 E6  u in g n  rg e twa   mpi e   y P l 8 E7 f so   e e fam n  sa l d b   CR  d is re  no e k roi  x e so   e trp RES  i f n a  n e td it  u a y t e prsin v co  l c - n o a d d te rsr t n e zme p s in a d 6× h s tg A tr ie t c t n o  e t cin d g s o   d P R, h   e o b n n  l mi   e , d e  h   e t ci   n y   o i o     i o t n i a . f  d ni ai   fr s it   ie t n a   C T e rc m ia tp a d e i f o r o i n s pRE - e - V5 E E   a  ban d. h n t n fce     t  1  el y l fca n  0 0 A trsr e i gc l r  yG 8 asa l  a s  l S n o HP 8 6 7 W o tie T e   a s t i i o B 6 c l b   p e tmie2 0 . f   e n n  ut e b   41 ,   b yt n — s r e d

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